ИНФОРМАЦИЯ

Инактивация х хромосомы у женщин при бесплодии


Исследование неравновесной (неслучайной) инактивации Х-хромосомы

Неравновесная инактивация Х-хромосомы может свидетельствовать о наличии минимальных генетических перестроек, что оказывает негативное влияние на функцию яичников. Исследование неравновесной инактивации Х-хромосомы является эффективным методом генетического диагностирования, который позволяет провести анализ состояния активных хромосом в женском организме.

Аномалии в ДНК матери – прямая угроза рождению здорового ребёнка, способного в течение жизни развиваться умственно и физически. Пройдите обследование в МЖЦ, чтобы получить семейный анамнез, выяснить причины бесплодия, правильно подготовиться к ЭКО. У нас вы можете проконсультироваться по вопросам возможностей лечения генетических отклонений.

Срок изготовления:

14 дней

Биоматериал:

Кровь из вены

График приема:

С 8:00 до 12:00 с понедельника по субботу

Пациенты:

С 18 лет (взрослые)

Стоимость анализа на онтогенетическую аномалию*

  • 4 800 Р Исследование неравновесной (неслучайной) инактивации Х-хромосомы

Каждая клетка организма женщины содержит набор из двух Х-хромосом, одна из которых активна, вторая – нет. Подобное клеточное состояние позволяет минимизировать риск развития генных мутаций, которые в тяжелой форму могут привести к гибели. Подобный феномен, наблюдающийся в половых хромосомах, происходит в процессе внутриутробного развития плода. 

Одна из половых хромосом спонтанно утрачивает свою функцию и структуру, что называется процессом случайной инактивации. При небольших мутациях – делеции, происходит запуск механизма, который приводит к утрате функций половой Х-хромосомы и сбою детородной программы женского организма.

Показания:

  • наличие стойкого женского бесплодия, независимо от возраста;
  • склерополикистоз яичников;
  • некоррегируемые перепады гормональной активности яичников;
  • преждевременное увядание и/или истощение яичников.

Интерпретация полученных результатов

Неслучайная инактивация Х-хромосомы может оцениваться исключительно опытным специалистом в данной сфере. В результатах анализа указывается наличие или отсутствие неравновесной инактивации Х-хромосомы. При ее обнаружении возможны генетические проблемы в диагностировании женского бесплодия.

Женщины должны знать, что исследование неравновесной инактивации Х-хромосомы позволяет выявить состояние половой хромосомы. При выявлении структурных изменений речь идет о частичной утрате их функции, что негативно сказывается на детородной функции женского организма. Проведение анализа позволит более точно диагностировать истинную причину бесплодия и скорректировать схему лечения.

Стоимость исследования неравновесной (неслучайной) инактивации Х-хромосомы – 4 800 рублей.

Чтобы записаться на прием или получить консультацию, звоните по круглосуточному номеру

+7 (495) 150-36-41

или заполните форму

Инактивация х хромосомы у женщин при бесплодии

Исследование неслучайной инактивации Х-хромосомы – это метод генетической диагностики, при помощи которого исследуют состояние активной (функционирующей) Х-хромосомы клеток женского организма.

Сроки выполнения до 15 дней
Синонимы (rus) Анализ неравновесной инактивации Х-хромосомы, определение неслучайной инактивацииглавной Х-хромосомы
Cинонимы (eng) X-inactivation
Методы Цитогенетическое тестирование при помощи спектрального кариотипирования
Единицы измерения Результат представлен в виде специальной записи, отражающей структуру хромосомного набора. В заключении непосредственно указывается обнаружена, или не обнаружена инактивация Х-хромосомы.
Подготовка к исследованию Забор биологического материала и подготовка к его сдаче производится по общим правилам. Лучше сдавать анализ в первой половине дня, исключить употребление пищи и курение не менее, чем за 2 часа. За неделю до забора крови должны быть исключены вредные воздействия на организм, в том числе медикаментозные.
Тип биоматериала и способы его взятия Кровь из вены исследуемой женщины

Каждая из клеток женского организма в своем хромосомном наборе содержит две Х-хромосомы. Одна из них пребывает в активном состоянии, а вторая неактивна. Благодаря этому ликвидируется избыток генетического материала, который мог бы стать причиной разных генных мутаций и гибели женского организма. Такой феномен естественной дезактивации одной из половых хромосом происходит еще внутриутробно. Как только формируется хромосомный набор эмбриона и в нем оказывается две полноценные Х-хромосомы, что определяет женский пол, одна из половых хромосом спонтанно становится неактивной, утрачивая свою структуру и функции. Этот закономерный процесс называется случайной инактивацией Х-хромосомы.

На протяжении жизни женщины, размножающиеся клетки передают активированную и инактивированную хромосому дочерним клеткам. Если активная хромосома сохраняет свою структуру, женский организм идеально функционирует. Но в тех случаях, когда эта Х-хромосома становится жертвой небольших мутаций (как правило, это делеции – отрыв фрагментов), включается специальный ген XIST. Он запускает неслучайную инактивацию измененной активной хромосомы. При этом она утрачивает часть своих функций. В первую очередь, страдает возможность полноценно кодировать информацию в отношении детородных функций женского организма.

Важно помнить! Анализ неравновесной инактивации Х-хромосомы – это не что иное, как определение состояния единственной функционирующей женской половой хромосомы. Обнаружение ее структурных изменений является свидетельством частичной утраты функций, что не может не сказаться на функциональных возможностях женского организма!

Исследуя структуру Х-хромосом женщины на предмет обнаружения неравновесной инактивации, можно сделать вывод о причинах женского бесплодия или нарушений менструально-овуляторной деятельности. Целесообразность приводить подобное исследование возникает при:

  • Стойком бесплодии у женщин всех возрастных групп;
  • Склерополикистозе яичников;
  • Преждевременном истощении и увядании яичников;
  • Некорригируемых перепадах гормональной активности яичников, сочетающихся любыми нарушениями их структуры.

Оценкой результатов анализа должен заниматься исключительно знающий специалист. В заключении указывается обнаружена или не обнаружена неслучайная Х-хромосомная инактивация. Если она имеет место, это говорит, что проблема бесплодия или другие нарушения женской половой сферы вызваны поломками на генном уровне.

Стоимость анализов Вопрос: Здравствуйте! Просьба, написать стоимость следующих анализов. Планирую сдавать в г.Сочи Старонасыпная ул., 22, микрорайон Адлер, БЦ Офис Плаза, эт. 2 Для женщины: 1.УЗИ органов малого таза на 5-8 день менструального цикла. 2.Определение группы крови( в том числе и резус фактора). 3.Клинический анализ крови, включая свертываемость крови 4.Биохимический анализ крови (в т.ч. глюкоза, общий белок, прямой и непрямой билирубин, мочевина) 5.Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С 6.Коагулограмма (по показаниям) 7.Общий анализ мочи 8.Исследование состояния матки и маточных труб (лапароскопия, гистеросальпингография или гистеросальпингоскопия) — по показаниям. 9.Инфекционное обследование: — бактериологическое исследование отделяемого влагалища, цервикального канала из уретры (мазок на флору) — микроскопическое исследование отделяемого цервикального канала на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы, трихомонады, грибы рода Candida (посев из цервикального канала) — ПЦР (хламидии, уреа- и микоплазмы, вирус простого герпеса I-II типов, цитомегаловирус) (цервикальный канал) — определение антител класса М, G на токсоплазму, краснуху (кровь) 10.ЭКГ 11.Флюорография легких (действительна 12 месяцев). 12.Консультация терапевта 13.Кольпоскопия и цитологическое исследование шейки матки . 14.Маммография (женщинам старше 35 лет), УЗИ молочных желез (женщинам до 35 лет). 15.Хромосомный анализ супружеским парам старше 35 лет, женщинам, имеющим в анамнезе случаи врожденных пороков развития и хромосомных болезней, в том числе и у близких родственников; женщинам, страдающим первичной аменореей. 16.Гистероскопия и биопсия эндометрия (по показаниям). 17.Гормональное обследование: кровь на 2-5 дни менструального цикла: ЛГ, ФСГ, пролактин, тестостерон (св., общ.), эстрадиол, прогестерон, кортизол (800-1700), Т3 св, Т4 св, ТТГ, СТГ, АМГ , 17-ОП, ДГА-S . кровь на 20-22 день цикла: прогестерон. 18. Консультация эндокринолога(по показаниям). 19. Заключение профильных специалистов при наличии экстрагенитальной патологии (по показаниям). 20.УЗИ щитовидной железы и паращитовидных желез, почек и надпочечников (по показаниям). Для мужчины: 1.Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С (анализы действительны 3 месяца). 2. Спермограмма и МАР-тест 3. Микроскопическое исследование эякулята на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы, трихомонады, грибы рода Candida (посев эякулята) (анализы действительны 6 месяцев). 4.ПЦР (хламидии, уреа- и микоплазмы, вирус простого герпеса I-II типов, цитомегаловирус) (эякулят). 5.Консультация андролога/уролога .

источник

kowara, пишет 18 ноября 2016, 20:42 Москва

Пол: Женский Требуется: генетик

Здравствуйте. Подскажите, пожалуйста, у меня выявлена неслучайная инактивация X-хромосомы: генотип 24/25, (N 20-26). Анализ по крови, метод КФ-МЧ-ПЦР CAG-повтора 1 экзона гена AR. Ещё 1 анализ — метод исследования: прямое определение аллелей CGG-повтора в гене FMR1 методом метил-специфической ПЦР, заключение — определена аллель CGG-повтора 32 в гомозиготный состоянии. Мне 31 год, планируем ЭКО и необходимо понимать нужна ли прединплантационная диагностика или нет. Эта неслучайная инактивация — это серьезно? Что означает это и генотип? Спасибо большое.

Здравствуйте, обычно в клетках тела женщины гены считываются и работают только с одной из Х-хромосом. Вторая при этом находится в неактивном состоянии. Как правило, Х-хромосома инактивируется в конкретной клетке случайным образом, поэтому в целом, в организме примерно в 50% клеток работает одна Х- хромосома, в остальных 50% — другая. При неравновесной инактивации Х-хромосом это соотношение далеко от 50/50. Т.е. в большей части клеток по каким-то причинам преимущественно инактивирована одна и та же Х-хромосома. Это не несет для женщины каких-либо клинических последствий, если у женщины в оставшейся активной Х-хромосоме нет мутированных генов. Если они есть, то у такой женщины могут нарушаться определённые функции, связанные с работой этих генов. Есть мнение, что неравновесная (неслучайная) инактивация Х-хромосом ассоциирована с преждевременным истощением яичников у женщин. ПГД в этом случае Вам делать не нужно, Т.к. Нет конкретного Х-сцепленного заболевания, которое можно было бы анализировать у эмбрионов. Однако для более однозначного ответа все же стоит пройти очную консультацию генетика с тщательной оценкой семейного анамнеза. Количество CGG повторов в гене FMR1 у Вас нормальное. Риск рождения ребёнка с синдромом Мартина-Белл у Вас не увеличен. ПГД Вы можете сделать просто на все пары хромосом, исключив хромосомную патологию у эмбрионов до их подсадки в полость матки. Это не по медицинским показаниям, а просто по желанию, Т.к. В целом известно, что ПГД (методом CGH) увеличивает эффективность эко на 30%. При необходимости более подробной информации обращайтесь к нам за медико-генетической консультацией, также проводим ПГД.

Подскажите, пожалуйста, у меня нет » конкретного Х-сцепленного заболевания, которое можно было бы анализировать у эмбрионов»- это по результатам анализа или в моих анализах нет отношения к ПГД и мне необходимо сдать ещё анализы по результатам которых можно это определить?

Здравствуйте, из Ваших анализов можно сделать вывод только о двух генных заболеваниях с х-сцепленным типом наследования — это синдром Мартина-Белл (ген FMR1) и спино-бульбарная амиотрофия Кеннеди (ген AR). Вы не являетесь скрытой гетерозиготной носительницей наиболее частых мутаций в этих генах, а значит риск рождения у Вас детей с этими заболеваниями не повышен. А вообще, х-сцепленных болезней существует множество и проверять их все просто так, без особых показаний, дорого. Сходите к генетику на очный приём, в данной ситуации важно собрать подробный семейный анамнез.

С удовольствием посещу Вас.

Подскажите, какие анализы необходимо мне сдать, чтобы по результатам их получить полную консультацию по семейным анамнезам?

Приобрести эффективные лекарства для лечения этого заболевания

источник

Анеуплоидия по Х-хромосоме — одна из наиболее частых онтогенетических аномалий. Относительная устойчивость кариотипа человека к хромосомным аномалиям Х-хромосомы может объясняться инактивацией Х-хромосомы, процессом, эпигенетически подавляющим большинство генов в одной из двух Х-хромосом у женщин, не давая им производить какие-либо продукты. Здесь мы обсудим хромосомный и молекулярный механизмы инактивации Х-хромосомы.

Инактивация Х-хромосомы. Теория инактивации Х-хромосомы гласит, что в соматических клетках здоровых женщин (но не у мужчин) одна Х-хромосома инактивируется в начале эмбрионального развития, уравнивая таким образом экспрессию генов этой хромосомы у двух полов. В нормальных женских клетках выбор инактивируемой Х-хромосомы произволен, а затем поддерживается в каждом клоне клетки.

Таким образом, женщины мозаичны по экспрессии Х-сцепленных генов; некоторые клетки экспрессируют аллели, унаследованные от отца, другие клетки — от матери. Этот образец экспрессии генов отличает большинство Х-сцепленных генов от импринтируемых генов (также экспрессирующих только один аллель, но определяемых родительским началом не случайно), а также от большинства аутосомных генов, экспрессирующих оба аллеля.

Хотя неактивная Х-хромосома сначала была обнаружена цитологически по присутствию гетерохроматиновой массы (названной тельцем Барра) в интерфазных клетках, существует много эпигенетических характеристик, различающих активные и неактивные Х-хромосомы. Проливая свет на механизмы Х-инактивации, эти особенности могут быть диагностически значимыми для установления неактивной Х-хромосомы в клиническом материале.

Хромосомные характеристики Х-инактивации: — Инактивация большинства генов, расположенных на неактивной Х-хромосоме

— Произвольный выбор одной из двух Х-хромосом в женских клетках

— Неактивная Х-хромосома: а) гетерохроматиновая (тельце Барра) б) поздно реплицируется в S фазе в) экспрессирует XIST-PHK

г) связана с модификациями гистона macroh3A в хроматине

Для уравновешивания экспрессии Х-хромосомы у самок и самцов используются различные способы компенсации дозы гена.

Область промотора многих генов в неактивной Х-хромосоме существенно модифицируется присоединением метильной группы к цитозину при действии фермента ДНК-метилтрансферазы. Как уже упоминалось в контексте геномного импринтинга в главе 5, такое метилирование ДНК связано с CpG динуклеотидами и приводит к неактивному состоянию хроматина. Дополнительные различия между активными и неактивными Х-хромосомами связаны с гистоновым кодом и оказались существенной частью механизма Х-инактивации.

Например, содержание варианта гистона macroh3A очень возрастает в неактивном хроматине Х-хромосом и позволяет различить две хромосомы в женских клетках.

У пациентов с дополнительными Х-хромосомами все Х-хромосомы, кроме одной, инактивируются. Таким образом, все диплоидные соматические клетки как у мужчин, так и у женщин, имеют единственную активную Х-хромосому, независимо от общего числа Х- или Y-хромосом.

Хотя инактивация Х-хромосомы, несомненно, является хромосомным феноменом, не все гены в Х-хромосоме подвергаются инактивации. Расширенный анализ экспрессии почти всех генов Х-хромосомы показал, что по крайней мере 15% генов избегают инактивации и экспрессируются как в активных, так и неактивных Х-хромосомах . Кроме того, еще для 10% генов показана переменная инактивация; т.е. они избегают инактивации у одних женщин, но инактивируются у других.

Примечательно, что эти гены не распределены произвольно по Х-хромосоме: большинство генов, избегающих инактивации, расположены на плече Хр (до 50%), по сравнению с Xq (несколько процентов). Данный факт имеет большое значение для генетического консультирования в случаях частичной хромосомной анеуплоидии X, так как дисбаланс генов на Хр может иметь большее клиническое значение, чем дисбаланс Xq.

Инактивация Х-хромосомы включает этап стабилизации Xist РНК, которая покрывает неактивную хромосому.

При исследованиях структурно аномальных инактивированных Х-хромосом был картирован центр Х-инактивации в проксимальном отделе Xq, в полосе Xql3. Центр Х-инактивации содержит необычный ген XIST (англ. Xinactivate specific transcripts; специфическая транскрипция инактивированной Х-хромосомы), оказавшийся ключевым управляющим локусом Х-инактивации. Ген XIST имеет новую характеристику: он экспрессируется только в аллеле на неактивной Х-хромосоме; он отключен на активной Х-хромосоме как в мужских, так и в женских клетках.

Хотя точный способ действия гена XIST неизвестен, Х-инактивация не может происходить в его отсутствие. Продукт XIST — некодирующая белок РНК, остающаяся в ядре в тесной ассоциации с неактивной Х-хромосомой и тельцем Барра.

Х-инактивация в норме происходит в женских соматических клетках случайным образом и приводит к мозаицизму по двум популяциям клеток, экспрессирующих аллели одной или другой Х-хромосомы. Тем не менее существуют исключения из этого правила, когда в кариотипе имеются структурно аномальные Х-хромосомы. Например, почти у всех пациентов с несбалансированными структурными аномалиями Х-хромосомы (включая делеции, дупликации и изохромосомы) структурно аномальная хромосома всегда неактивна, что, вероятно, отражает вторичный отбор против генетически несбалансированных клеток, которые могли бы привести к значимым клиническим аномалиям.

Читайте также:  Молитва от бесплодия чтобы родить ребенка

Из-за преимущественной инактивации аномальной Х-хромосомы такие аномалии Х-хромосомы имеют меньшее влияние на фенотип, чем аналогичные аномалии аутосом, и, следовательно, более часто обнаруживаются.

Неслучайную инактивацию наблюдают также в большинстве случаев транслокаций X на аутосому. Если такая транслокация сбалансирована, избирательно инактивируется нормальная Х-хромосома, и две части транслоцированной хромосомы остаются активными, вероятно, снова отражая отбор против клеток с неактивированными аутосомными генами. В несбалансированном потомстве сбалансированного носителя, тем не менее, присутствует только продукт транслокации, несущий центр Х-инактивации, и такая хромосома неизменно инактивируется; нормальная Х-хромосома всегда активна.

Эти неслучайные образцы инактивации имеют общий эффект снижения, хотя и не всегда устранения, клинических последствий конкретного хромосомного дефекта. Поскольку образцы Х-инактивации хорошо согласуются с клиническим результатом, определение цитогенетическим или молекулярным анализом индивидуального образца Х-инактивации показано во всех случаях транслокации X и аутосом.

Одна закономерность, иногда наблюдающаяся у сбалансированных носителей транслокаций Х-хромосомы на аутосому, проявляется тем, что сам разрыв может вызывать мутации, нарушая ген в точке транслокации. Единственная нормальная копия конкретного гена инактивируется в большинстве или всех клетках из-за неслучайной инактивации нормальной Х-хромосомы, таким образом приводя к экспрессии у женщины сцепленного с полом признака, обычно наблюдающегося только у гемизиготных мужчин.

Выявлено несколько Х-сцепленных генов, когда типичный фенотип сцепленного с полом состояния обнаруживали у женщин с доказанной транслокацией Х-хромосомы на аутосому. Главный клинический вывод из этой информации — если женщина проявляет сцепленный с полом фенотип, обнаруживаемый обычно только у мужчин, показан хромосомный анализ с высоким разрешением. Обнаружение сбалансированной транслокации может объяснить фенотипическую экспрессию и выявить вероятную позицию гена на карте Х-хромосомы.

Мозаичный эффект, связанный с Х-хромосомой, вызывается случайной инактивацией одной Х-хромосомы в каждой клетке-предшественнице. Клетки, у которых + аллель находится на активной хромосоме, обладают диким фенотипом, но клетки,

у которых на активной хромосоме находится аллель, приобретают мутантный фенотип.

источник

Исследование неслучайной инактивации Х-хромосомы – это метод генетической диагностики, при помощи которого исследуют состояние активной (функционирующей) Х-хромосомы клеток женского организма.

Сроки выполнения до 15 дней
Синонимы (rus) Анализ неравновесной инактивации Х-хромосомы, определение неслучайной инактивацииглавной Х-хромосомы
Cинонимы (eng) X-inactivation
Методы Цитогенетическое тестирование при помощи спектрального кариотипирования
Единицы измерения Результат представлен в виде специальной записи, отражающей структуру хромосомного набора. В заключении непосредственно указывается обнаружена, или не обнаружена инактивация Х-хромосомы.
Подготовка к исследованию Забор биологического материала и подготовка к его сдаче производится по общим правилам. Лучше сдавать анализ в первой половине дня, исключить употребление пищи и курение не менее, чем за 2 часа. За неделю до забора крови должны быть исключены вредные воздействия на организм, в том числе медикаментозные.
Тип биоматериала и способы его взятия Кровь из вены исследуемой женщины

Каждая из клеток женского организма в своем хромосомном наборе содержит две Х-хромосомы. Одна из них пребывает в активном состоянии, а вторая неактивна. Благодаря этому ликвидируется избыток генетического материала, который мог бы стать причиной разных генных мутаций и гибели женского организма. Такой феномен естественной дезактивации одной из половых хромосом происходит еще внутриутробно. Как только формируется хромосомный набор эмбриона и в нем оказывается две полноценные Х-хромосомы, что определяет женский пол, одна из половых хромосом спонтанно становится неактивной, утрачивая свою структуру и функции. Этот закономерный процесс называется случайной инактивацией Х-хромосомы.

На протяжении жизни женщины, размножающиеся клетки передают активированную и инактивированную хромосому дочерним клеткам. Если активная хромосома сохраняет свою структуру, женский организм идеально функционирует. Но в тех случаях, когда эта Х-хромосома становится жертвой небольших мутаций (как правило, это делеции – отрыв фрагментов), включается специальный ген XIST. Он запускает неслучайную инактивацию измененной активной хромосомы. При этом она утрачивает часть своих функций. В первую очередь, страдает возможность полноценно кодировать информацию в отношении детородных функций женского организма.

Важно помнить! Анализ неравновесной инактивации Х-хромосомы – это не что иное, как определение состояния единственной функционирующей женской половой хромосомы. Обнаружение ее структурных изменений является свидетельством частичной утраты функций, что не может не сказаться на функциональных возможностях женского организма!

Исследуя структуру Х-хромосом женщины на предмет обнаружения неравновесной инактивации, можно сделать вывод о причинах женского бесплодия или нарушений менструально-овуляторной деятельности. Целесообразность приводить подобное исследование возникает при:

  • Стойком бесплодии у женщин всех возрастных групп;
  • Склерополикистозе яичников;
  • Преждевременном истощении и увядании яичников;
  • Некорригируемых перепадах гормональной активности яичников, сочетающихся любыми нарушениями их структуры.

Оценкой результатов анализа должен заниматься исключительно знающий специалист. В заключении указывается обнаружена или не обнаружена неслучайная Х-хромосомная инактивация. Если она имеет место, это говорит, что проблема бесплодия или другие нарушения женской половой сферы вызваны поломками на генном уровне.

Стоимость анализов Вопрос: Здравствуйте! Просьба, написать стоимость следующих анализов. Планирую сдавать в г.Сочи Старонасыпная ул., 22, микрорайон Адлер, БЦ Офис Плаза, эт. 2 Для женщины: 1.УЗИ органов малого таза на 5-8 день менструального цикла. 2.Определение группы крови( в том числе и резус фактора). 3.Клинический анализ крови, включая свертываемость крови 4.Биохимический анализ крови (в т.ч. глюкоза, общий белок, прямой и непрямой билирубин, мочевина) 5.Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С 6.Коагулограмма (по показаниям) 7.Общий анализ мочи 8.Исследование состояния матки и маточных труб (лапароскопия, гистеросальпингография или гистеросальпингоскопия) — по показаниям. 9.Инфекционное обследование: — бактериологическое исследование отделяемого влагалища, цервикального канала из уретры (мазок на флору) — микроскопическое исследование отделяемого цервикального канала на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы, трихомонады, грибы рода Candida (посев из цервикального канала) — ПЦР (хламидии, уреа- и микоплазмы, вирус простого герпеса I-II типов, цитомегаловирус) (цервикальный канал) — определение антител класса М, G на токсоплазму, краснуху (кровь) 10.ЭКГ 11.Флюорография легких (действительна 12 месяцев). 12.Консультация терапевта 13.Кольпоскопия и цитологическое исследование шейки матки . 14.Маммография (женщинам старше 35 лет), УЗИ молочных желез (женщинам до 35 лет). 15.Хромосомный анализ супружеским парам старше 35 лет, женщинам, имеющим в анамнезе случаи врожденных пороков развития и хромосомных болезней, в том числе и у близких родственников; женщинам, страдающим первичной аменореей. 16.Гистероскопия и биопсия эндометрия (по показаниям). 17.Гормональное обследование: кровь на 2-5 дни менструального цикла: ЛГ, ФСГ, пролактин, тестостерон (св., общ.), эстрадиол, прогестерон, кортизол (800-1700), Т3 св, Т4 св, ТТГ, СТГ, АМГ , 17-ОП, ДГА-S . кровь на 20-22 день цикла: прогестерон. 18. Консультация эндокринолога(по показаниям). 19. Заключение профильных специалистов при наличии экстрагенитальной патологии (по показаниям). 20.УЗИ щитовидной железы и паращитовидных желез, почек и надпочечников (по показаниям). Для мужчины: 1.Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С (анализы действительны 3 месяца). 2. Спермограмма и МАР-тест 3. Микроскопическое исследование эякулята на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы, трихомонады, грибы рода Candida (посев эякулята) (анализы действительны 6 месяцев). 4.ПЦР (хламидии, уреа- и микоплазмы, вирус простого герпеса I-II типов, цитомегаловирус) (эякулят). 5.Консультация андролога/уролога .

источник

Специалисты Клинического госпиталя на Яузе проводят полный спектр исследований для выявления причин бесплодия у мужчин и женщин и разрабатывают индивидуальные программы лечения для успешного зачатия.

Бесплодным считается брак, в котором женщина не может забеременеть на протяжении 12 месяцев при регулярной половой жизни без контрацепции. Бесплодие может быть обусловлено генетическими особенностями одного или обоих супругов.

Точное выявление причин бесплодия позволяет выбрать правильную тактику лечения и значительно ускорить достижение желанного результата — наступления беременности и рождения ребенка.

Не теряйте время на неэффективное лечение! Пройдите точную диагностику.

  • кариотипирование;
  • экспертная спермограмма;
  • анализ мутаций в гене муковисцидоза (CFTR);
  • определение делеций локуса AZF хромосомы Y (регионов а, b, c);
  • определение индекса фрагментации хроматина (HALO- или TUNEL-тесты);
  • FISH-исследование сперматозоидов — выявление численных хромосомных аномалий (анеуплоидий);
  • электронно-микроскопическое исследование сперматозоидов (ЭМИС);
  • определение числа (CAG)-повторов в гене андрогенового рецептора.

Выявив причины бесплодия и объективно оценив выраженность нарушений, репродуктолог сможет рекомендовать оптимальный для каждой пары метод преодоления бесплодия — заместительная гормональная терапия, искусственная инсеминация, ЭКО с ИКСИ, МЕЗА, ТЕЗА, ПЕЗА, ЭКО с донорской спермой и др. Современные репродуктивные технологии позволяют достичь успеха практически при любой сложности проблемы.

Пройдите обследование для исключения генетических причин бесплодия при:

  • выраженной олигозооспермии или азооспермии (обструктивной, необструктивной);
  • тератозооспермии;
  • астенозооспермии:
    • азооспермия — отсутствие сперматозоидов в эякуляте (обструктивная — связана с непроходимостью семявыносящих путей, необструктивная — при нарушении образования сперсматозоидов в яичках),
    • олигозооспермия — сниженное количество сперматозоидов в эякуляте. О существенном угнетении сперматогенеза говорят при концентрации сперматозоидов менее 5 млн/мл эякулята,
    • тератоззоспемия — нарушение морфологии сперматозоидов,
    • астенозооспермия — нарушение подвижности сперматозоидов.

Записаться на консультацию

  • хромосомные нарушения— носительство сбалансированной реципрокной или Робертсоновской транслокаций, инверсий и др. структурных изменений кариотипа в большинстве случаев сопровождаются нарушениями сперматогенеза. Аномалии кариотипа встречаются у мужчин с азооспермией и с олигозооспермией.
  • аномалии числа половых хромосом — синдром Клайнфельтера (47,ХХУ); некоторые случаи дисомии хромосомы Y (47,XYY). Синдром Клайнфельтера является крайне распространённой патологией: на каждые 500 — 700 новорождённых мальчиков приходится 1 ребёнок с данной патологией. Синдром Клайнфельтера является одной из самых частых причин мужского гипогонадизма (гипергонадотропного гипогонадизма) и бесплодия.
  • структурные аномалии половых хромосом.
  • делеции локусаAZFхромосомыY. «Фактор азооспермии» — локус АZF включает гены, отвечающие за сперматогенез. Он делится на 3 региона: AZFa, AZFb. AZFc, делеции которых сопровождаются нарушениями сперматогенеза различной степени тяжести. Так, делеции в AZFa обычно сопровождаются синдромом «только клетки Сертоли». В случае делеции локусов AZFb, AZFс возможно обнаружение в тканях яичек сперматозоидов пригодных для процедуры ИКСИ. Делеции в локусе AZF в большинстве случаев возникают denovo в результате мутаций в клетках сперматогенного ряда или на ранних стадиях развития эмбриона. Делеции локуса AZF встречаются у 15% мужчин с выраженной идиопатической олигозооспермией и 20% мужчины с идиопатической необструктивной азооспермией.
  • мутации в гене AR — андрогеннового рецептора. Влияние числа (CAG)-повторов на сперматогенез до конца не доказано, однако повреждения гена в области гормонсвязывающего участка (делеции и точковые мутации) достоверно приводят к развитию олигоастенотератозооспермии. Примерно случаев азооспермии или выраженной олигозооспермии связаны с точковыми мутациями в гене рецептора андрогенов.
  • мутации в генах, приводящие к развитию гипогонадотропного гипогонадизма (синдром Каллмана и др. состояния).
  • мутации в гене муковисцидоза CFTR. Муковисцидоз относится к числу наиболее распространенных моногенных заболеваний в европейской популяции и в среднем встречается с частотой 1 больной ребенок на каждые 2500 новорожденных. Примерно 1 из 25 человек является гетерозиготным носителем мутации в гене CFTR. Мутации в гене CFTR приводят к нарушениям сперматогенеза различной степени тяжести, часто без манифестации других признаков муковисцидоза.
  • мутации в гене половой дифференцировки SRY.

Мутации в гене муковисцидоза CFTR приводят к врожденному отсутствию семявыносящих протоков (CBAVD, CUAVD) и непроходимости семявыносящих протоков.

Тератозооспермия и астенозооспермия могут быть обусловлены мутациями в отдельных генах или указывать на наличие хромосомных аномалий в кариотипе мужчины, а в сочетании с высокой степенью фрагментации хроматина в сперматозоидах свидетельствуют о нарушении оптимальных условий сперматогенеза и повышенной вероятности наличия численных хромосомных аномалий в сперматозоидах.

Мутации в генах, отвечающих за развитие гонад и их функционирование, в том числе генах, кодирующих гормоны ЛГ, ФСГ и их рецепторы, могут быть причиной бесплодия у мужчин. Однако данные нарушения встречаются настолько редко, что проводить генетические исследования для выявления возможной причины в рамках лечения в клиниках ВРТ не представляется целесообразным. Бесплодие может развиваться как следствие наличия у пациента генерализованного наследственного генетического заболевания (синдром Прадера-Вилли, синдром Нунан, гемохроматоз, анемия Фанкони, бета-талассемия и др.).

К бесплодию у мужчин могут приводить и различные экзогенные факторы облучение, перегрев яичек, курение и чрезмерное потребление алкоголя, перенесенные инфекционные заболевания, производственные яды, лекарства, болезни матери при беременности: сахарный диабет, фенилкетонурия и гипотиреоз, перенесенные инфекционные заболевания.

  • Кариотпирование
  • Преимплантационный генетический скрининг анеуплоидий
  • Исследование уровня рецептивности эндометрия
  • Исследование мутаций в генах системы гемостаза
  • Исследование неравновесной инактивации хромосомы Х

Пройдите обследование для исключения генетических причин бесплодия при:

  • бесплодии неясного генеза
  • неудачных попытках искусственного оплодотворения, в том числе ЭКО
  • нарушении имплантации эмбрионов
  • невынашивании беременности
  • спонтанных абортах и случаях неразвивающейся беременности в анамнезе
Читайте также:  Вульвовагинит может привести к бесплодию

Хромосомные нарушения:

  • нарушения механизмов расхождения хромосом в процессе оогенеза приводят к образованию яйцеклеток с численными хромосомными нарушениями. После 35 лет доля яйцеклеток с хромосомной патологией возрастает и может достигать 80% после 40 лет. Оплодотворение яйцеклетки с хромосомной патологией приводит к формированию анеуплоидного эмбриона. В большинстве случаев (за исключением трисомии хромосом 13, 18, 21 и численных аномалий половых хромосом) такие эмбрионы рано или поздно останавливаются в развитии, что приводит к самопроизвольному аборту или неразвивающейся беременности. Наличие хромосомной патологии у эмбриона также может быть причиной нарушения имплантации в стенку матки.
  • хромосомные аберрации— носительство сбалансированной реципрокной или Робертсоновской транслокаций, инверсий и др. структурных изменений кариотипа в большинстве случаев приводят к образованию анеуплоидных яйцеклеток.
  • аномалии числа половых хромосом: синдром Шерешевского-Тернера (45,Х); синдром трисомии хромосомы Х (47,ХХХ), синдром Свайера (46,XY).
  • структурные аномалии половых хромосом могут быть причиной первичной недостаточности функции яичников.

Молекулярно-генетические нарушения:

  • Мутации в генах, отвечающих за гомеостаз — повышенное содержание гомоцистеина, повышенная свертываемость крови и склонность к тромбообразованию — могут быть причиной бесплодия и невынашивания беременности.
  • Нарушение рецептивности эндометрия и смещение времени имплантационного окна
  • Синдром Мартина-Белл (синдром ломкой fragile X mental retardation syndrome,FRAXA) является наиболее частой причиной умственной отсталости у мальчиков. Развитие синдрома связано с экспансией тринуклеотидных повторов (CGG) в промоторной области гена FMR1 хромосомы Х. У здоровых индивидов число этих повторов колеблется от 6 до 54, а увеличение этого числа свыше 200 повторов приводит к феномену ломкой и клиническому проявлению заболевания. При количестве повторов от 55 до 200 (предмутационное состояние) заболевание в типичной форме не проявляется, но существует высокая вероятность проявления заболевания у потомков. У женщин-носителей предмутационного состояния в случаев развивается синдром раннего истощения яичников.
  • Мутации в генах, обуславливающие развитие вторичной недостаточности функции яичников — гипогонадотропного гипогонадизма (нарушения в работе гипоталамо-гипофизарной регулирующей системы). Например, синдром Каллмана и др. состояния.

Также как и в случае мужчин, мутации в генах, отвечающих за функционирование репродуктивной системы, в том числе генах половых гормонов и их рецепторов, могут приводить к бесплодию. Бесплодие может быть следствием наличия генерализованного наследственного генетического заболевания (синдром Прадера-Вилли, адреногенитальный синдром, галактоземия, муковисцидоз, гемохроматоз, бета-талассемия и др.).

Воздействие неблагоприятных факторов окружающей среды, стрессы, перенесенные инфекции, в том числе во время внутриутробного развития, также могут приводить к развитию бесплодия.

Для установления причин бесплодия специалисты Клинического госпиталя на Яузе рекомендуют пройти консультации уролога, акушера-гинеколога, эндокринолога, клинического генетика. Консультация генетика рекомендуется всем парам, обращающимся к помощи ВРТ, и является обязательной при обнаружении той или иной формы генетической патологии у одного из партнеров.

источник

Основное генетическое различие между полами заключается в наличии разного числа Х-хромосом — одна Х-хромосома у самцов и две у самок. Для того, чтобы компенсировать лишнюю дозу гена, у самок происходит инактивация Х-хромосомы. В раннем эмбриогенезе в эпибласте полностью инактивируется одна из Х-хромосом. Она конденсируется, переходя в неактивное состояние, превращаясь в тельце Барра (рис.1). Процесс инактивации Х-хромосомы называется дозовой компенсацией.

Имеется два вида инактивации — специфическая, когда инактивируется определенная Х-хромосома, например только отцовская Х-хромосома у сумчатых (кенгуру), и случайная, когда выбор того, какая Х-хромосома будет инактивирована случаен (плацентарные млекопитающие). Хотя во внезародышевых органах плацентарных также происходит специфическая инактивация. Центром инактивации является участок Х-хромосомы, называемый Xic (рис.2, 3), имеющий длину по разным данным 35, 80 тпн, или даже больше, что зависит от рассматривания прилежащих последовательностей, участвующих в регуляции инактивации. Xic содержит, как минимум, Xist — ген, кодирующий нетранслируемую RNA, Tsix — антисмысловой локус, содержащий различно метилируемый минисателлитный маркер DXPas34. Так же, очевидно, в формировании Xic участвует последовательность на 3′ конце Xist. Вероятно, что другие регулирующие последовательности лежат дальше 3′ конца гена Xist. Один из таких регуляторов содержит Xce локус, открытый как модификатор выбора Х-хромосомной инактивации.

Инактивация разделяется на стадии: определение дозы, выбор, инициация, устанавливание и поддержание. Эти процессы являются генетически различными и все они, кроме поддержания, контролируются Xic. Во время счета дозы клетка определяет число Х-хромосом относительно числа аутосом. Помимо локусов на аутосомах в этом этапе принимает участие участок за 3′ конце Xist.

Во время выбора происходит определение того, какая из двух Х хромосом будет инактивирована. В этом процессе принимает участие последовательности в пределах Xist, Tsix и Xce.

Выбор того, какая Х-хромосома инактивируется, случаен, но это может регулироваться аллелями Xce (X-linced X controlling element). В различных мышиных линиях было обнаружено три таких аллеля — слабый Xcea, промежуточный Xceb и сильный Xcec. В гетерозиготах наиболее часто инактивируются те, которые несут более слабый аллель. Например, степень инактивации у гетерозигот Xcea/Xcec приблизительно 25:75. У гомозигот выбор происходит случайно. Xce локус расположен вблизи Xic. Предполагается, что Xce связывают транс-факторы, регулирующие работу генов в Xic, предопределяя выбор между Х-хромосомами. Инактивацию Х-хромосом можно увидеть, используя мышей с мутацией по гену окраски шерсти (например brindled) на одной Х-хромосоме и нормальный ген на другой. Клетки дикого типа дают черный цвет, а мутантные белый. (рис.4)

В недифференцированных клетках изначально гены Xist и Tsix экспрессируются одновременно на каждой Х-хромосоме. Но позже на одной из Х-хромосом репрессируется ген Tsix, что ведет к увеличению уровня экспрессии Xist. РНК Xist присоединяет различные белки, образуя комплексы, которые распределяются вдоль всей Х-хромосомы, запуская ее инактивацию. На другой хромосоме не происходит репрессии гена Tsix и его антисмысловая РНК связывает РНК Xist, блокируя ее накопление (рис.5). Такая хромосома останется в активном состоянии. РНК гена Xist не способна переходить с одной Х-хромосомы на другую.

На более поздних этапах происходит замена h3A гистона его аналогом macro h3A (см. обзор Гистоны) и метилирование h4K27, участие различных транс-факторов, CpG метилирование ДНК в промоторах. В конечном итоге происходит установление гетерохроматина по общей концепции (см. обзор Гетерохроматин). Поддержание инактивации. Инициация инактивации контролируется эксперссией Xist и, однажды установившись, инактивированное состояние больше не зависит от Xic и Xist. На гибридах человеческих и мышиных клеток показвно, что при делеции гена Xist человеческая Х-хромосома поддерживает инактивированное состояние, что указывает на независимое от Xist поддержание инактивации Х-хромосомы. Хотя присутствие Xist после установления инактивации стабилизирует ее.

Сокращения: Xic — Х inactivation centre -Центр инактивации Х-хромосомы. Xi -X inactive — инактивируемая Х хромосома.

Xa — X-active — активируемая Х хромосома.

источник

Роль неслучайной инактивации Х-хромосомы в формировании преждевременной недостаточности функции яичников

ГУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, Медико-генетический научный институт РАМН, НИИ Молекулярной медицины при ММА им. И.М.Сеченова, Москва

П реждевременная яичниковая недостаточность (ПНЯ) описывается как «многофакторный синдром», в развитии которого могут принимать участие генетические, иммунные, инфекционные, ятрогенные, психогенные и другие факторы [1]. Данная патология проявляется вторичной аменореей, низким уровнем эстрогенов, бесплодием на фоне повышенного уровня гонадотропинов (ФСГ, ЛГ). В структуре первичной аменореи ПНЯ составляет 10-28% [2]. У женщин с вторичной аменореей ПНЯ встречается с частотой 4-18% [3]. Согласно точке зрения большинства исследователей, ПНЯ формируется в результате делеций как в коротком, так и в длинном плечах Х-хромосомы (Xq) или наличия моногенных заболеваний. Делеции длинного плеча Хq представлены множеством вариантов. Область Xq13 является наиболее важным районом для поддержания функционирования яичников. Возможно, в этом участке находится центр инактивации Хq, что подтверждается клинической картиной, характерной для гипергонадотропного гипогонадизма. Наиболее протяженные делеции захватывают область Xq13 и ассоциированы с первичной аменореей, отсутствием молочных желез и полным истощением яичников [4-8]. Для Xq не найдено каких-либо определенных точек разрыва, хотя в свете современных молекулярно-генетических открытий терминальные делеции можно расположить по значимости их влияния на функционирование яичников в таком порядке: Xq13-21, Xq22-25 и Xq26-28. В 1995 г. Ogata и Matsuo выявили сильную корреляционную зависимость между функционированием яичников и представленной выше последовательностью делеций в длинном плече Хq [8]. Инактивация Хq (ИХХ) характерна для млекопитающих и заключается в том, что одна из двух родительских Хq (отцовская или материнская) случайным образом инактивируется для обеспечения одинакового количества функционирующих X-сцепленных генов у представителей обоих полов [9]. Однако в ряде случаев имеет место избирательная ИХХ одного из родителей. Существуют данные о том, что неслучайная ИХХ встречается в норме в экстраэмбриональных тканях [10], а также при некоторых патологических состояниях: у мозаиков 45Х/46ХХ [11], у женщин со структурными аберрациями Хq [12], у бессимптомных носителей синдрома Ретта (Х-сцепленное доминантное заболевание) [13] и при поликистозе и преждевременном истощении яичников [9, 14]. В целом частота неслучайной ИХХ в популяциях оценивается в 1,5-3,5% (Gale и соавт. 1997; Plenge и соавт. 1997; Lanasa и соавт. 1999) [15].

Выявление неслучайной ИХХ осуществляется с помощью методов, основанных на определении дифференциального метилирования активной и неактивной Хq. Непосредственно анализируются полиморфизмы Х-сцепленных генов — полиморфизм сайта узнавания рестриктазы BstXl в первом интроне гена фосфоглицерокиназы [10] или полиморфизм CAG-повтора в первом экзоне гена андрогенового рецептора (AR) [10, 16]. В том числе можно использовать метилчувствительную или метилспецифическую ПЦР с целью определения неслучайной инактивации Хq у пациентов с ПНЯ.

Материалы и методы Обследованы 72 женщины с ПНЯ. Средний возраст пациенток составил 33,4±0,8 года, средняя продолжительность заболевания — 6,3±0,7 года, средний уровень ФСГ — 106,4±4,8 МЕ/л, ЛГ — 90,5±5,6 МЕ/л, Е2 — 76,7±9,7 МЕ/л, ТТГ — 2,7±0,38 мМЕ/л, ингибин В — 10,6±1,16 пг/л при двух определениях. У этих пациенток самостоятельная менструация отсутствовала 6 мес и более. Исследование проводили у женщин Европейской части России.

Больным осуществляли полное клиническое обследование, включающее семейный анамнез, данные о менархе и регулярности предшествующих менструаций, акушерский анамнез. Всем обследованным проводили гинекологический осмотр, ультразвуковое исследование органов малого таза, определение уровней гормонов (ФСГ, ЛГ, ТТГ, Е2, ингибин В) и кариологическое исследование.

Цитогенетический анализ Хромосомные препараты готовили из культуры лимфоцитов периферической крови. Подсчитывали под микроскопом не менее 25 метафазных пластинок. Детальный анализ хромосом проводили на микрофотографиях с составлением кардиограммы. Дифференцированное окрашивание хромосом (G-метод) проводили по методу Seabright с предобработкой трипсином.

Выделение ДНК и определение неслучайной инактивации Xq Геномную ДНК выделяли по модифицированному методу фенол-хлороформной экстракции [17]. Затем геномную ДНК обрабатывали рестриктазой Hhal, которая только в том случае гидролизует цепи ДНК, если цитозин CpG-динуклеотида в ее сайтах узнавания не метилирован. Состав реакционной смеси: геномная ДНК — 1-2 мкг, буфер SEBufferY(lOx) («СибЭнзим», Новосибирск) — 2 мкл, рестриктаза Hhal («СибЭнзим», Новосибирск) — 10 ед., деионизированная вода — до 20 мкл. Реакционную смесь инкубировали при температуре 65°С в течение суток. Далее проводили ПЦР по описанному выше протоколу, как матрицу использовали 2 мкл смеси продуктов рестрикции. Длину CAG-повтора в гене AR определяли с помощью количественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции (КФ-ПЦР). Последовательности праймеров и условия амплификации описаны ранее [18]. Аналогом праймера CAGF2-HEX являлся праймер CAGF2-FAM (конъюгированный на 5-м конце с флуоресцентным красителем FAM). Фрагментный анализ осуществляли разделением ПЦР-продуктов на генетическом анализаторе ABI3100 согласно протоколам ABI Prism 3100 Genetic Analyzer Kits «Applied Biosystems». Идентификацию аллелей проводили с помощью программного обеспечения GeneMapper v. 3.5 «Applied Biosystems».

Во всех информативных случаях определялась ИХХ. Считалось, что ИХХ имеет место при выполнении двух условий: отношение площади большего пика к сумме площадей двух пиков превышает 70% и при амплификации с рестриктов и нативной геномной ДНК это отношение отличается более чем на 3% [9, 14]. Кроме того, исследование проводилось в пороговых уровнях 80 и 90%.

Таблица 1. Цитогенетический анализ

Таблица 2. Частота неслучайной ИХХ

Частота неслучайной ИХХ больные с ПНЯ

Результаты При изучении семейного анамнеза у 19 (26,4%) матерей наших пациенток отмечено несвоевременное выключение функции яичников: у 8 (11,1%) матерей преждевременная недостаточность яичников (до 40 лет), а у 11 (15,3%) — ранняя менопауза (до 45 лет). У матерей 8 (11,1%) пациенток были выявлены в анамнезе различные нарушения менструального ритма. Изучение преморбидного фона показало, что 45 (62,5%) больных имели высокий инфекционный индекс. Регулярные менструации установились с менархе у 60 (83,3%) женщин, средний возраст менархе составляет 13,2±1,4 года, олигоменорея отмечена у 12 (16,7%) больных. У 25 (34,7%) из 72 пациенток с ПНЯ в анамнезе были роды. У 19 (26,4%) пациенток — 1, у 6 (8,3%) — 2 родов. У 23 (31,9%) пациенток этой группы были аборты, у 4 (5,6%) — самопроизвольные выкидыши. В группе нерожавших пациенток аборты были только у 6 (8,3%) женщин. Таким образом, до начала заболевания фертильность была сохранена у 31 (43%) женщин с ПНЯ, т.е. практически у каждой 2-й пациентки. При клиническом обследовании 71 пациентки с ПНЯ выявлено: средний рост составил 161,5±3,8 см, средняя масса тела — 57,9±1,4 кг, индекс массы тела (ИМТ) — 24,7±3,6 кг/см 2 . Отмечено, что все женщины были правильного телосложения, с нормальным женским фенотипом, сохраненным интеллектом и у них отсутствовали какие-либо аномалии развития. Всем обследованным женщинам с ПНЯ было произведено исследование кариотипа. Среди 72 обследованных нами женщин аберрации Хq обнаружены у 3 (4,2%), из них 2 (2,8%) характеризовались низким уровнем мозаицизма и у 1 (1,4%) женщины — кариотип 45,Х. Данная пациентка фенотипически отличалась от описанных ранее больных низким ростом (150 см), диспластичными чертами — наличием деформированных ушных раковин, высоким арковидным небом, аномальным расположением зубов, короткой толстой шеей, низким ростом волос на затылке, широко расставленными сосками, наличием митрально-аортального порока сердца и аномальным развитием почек. Из 69 пациенток с нормальным кариотипом только 60 (87%) были гетерозиготы (информативны) по полиморфизму CAG-повтора гена андрогенного рецептора. Доля гомозигот по анализируемому локусу составила 9 (13%) женщин. Таким образом, количество информативных образцов ДНК составило 60 (87%). Для оценки неслучайной ИХХ мы использовали три пороговых уровня, классифицируемых, как і 70, і 80, і 90%.

Среди этих 60 женщин гетерозигот у 25% (15/60) была выявлена неслучайная инактивация Хq і 70%, у 11,7% (7/60) і 80%, у 3,3% (2/60) і 90%. Результаты цитогенетического анализа представлены в табл. 1, а частота неслучайной ИХХ — в табл. 2.

Читайте также:  Влияет ли ветрянка на бесплодие мужчин

Обсуждение В этом исследовании мы попытались разобраться, действительно ли неслучайная ИХХ имеет отношение к формированию ПНЯ. В задачу работы также входило изучение численных аномалий Хq у больных с ПНЯ. При исследовании кариотипа мы выявили 1 пациентку с наличием аномального клона 45,Х в кариотипе и 2 пациенток с низким уровнем мозаицизма по половым хромосомам 45,Х/46,ХХ (см. табл. 1). Подобные результаты описаны в литературе [19-21]. Подтверждением полученных нами данных являются ранее проведенные клинические наблюдения, согласно которым от 3 до 5% женщин с мозаичным 46,ХХ/45,Х кариотипом самостоятельно менструируют и в ряде случаев у них наступают самостоятельные беременности [22, 23]. Magee и соавт. описали пациентку с 45,Х-кариотипом, у которой было семь самостоятельно наступивших беременностей, однако скорее всего автор обследовал пациентку, имевшую ярко выраженный тканевый мозаицизм 46,ХХ/45,Х с преобладанием первого в яичниках, а второго в лимфоцитах периферической крови. Следует подчеркнуть, что у человеческого эмбриона 45,Х подобно всем млекопитающим с моносомией первично присутствуют герменогенные клетки, сохранение которых возможно в единичных экземплярах и является ключом к разгадке механизма фертильности при синдроме Тернера [24]. В ранее описанном случае больная с кариотипом 45,Х регулярно менструировала до 38 лет, однако подобно больным с дисгенезией гонад (синдром Тернера) она страдала митрально-аортальным пороком сердца и врожденной аномалией почек. Также обращало на себя внимание наличие у нее диспластичных черт, характерные для синдрома Тернера. Powell и соавт. высказали гипотезу о том, что ПНЯ может быть результатом нарушений в работе ограниченного числа генов, задействованных в развитии яичников [25, 26]. Широкий спектр аномалий Хq может вызвать патологию мейоза и в результате приводить к частичной гибели половых клеток [27]. Поэтому истощение запаса ооцитов у женщин может быть непосредственно связано с неспособностью обеспечить функционирование яичников в течение репродуктивного возраста. Однако мозаицизм 45,Х/46,ХХ в незначительном количестве клеток часто встречается в норме и увеличивается с возрастом [28-32]. Следовательно, наличие мозаицизма 45,Х/46,ХХ в незначительном проценте может и не является предрасполагающим фактором к ПНЯ. Установлено, что около 5% из 2000 генов, локализованных на Хq, избегают инактивации [33]. Гены кандидаты, участвующие в поддержании функции яичников, вероятно, находятся в этих эухроматиновых районах, однако до настоящего времени не проведены исследования, однозначно подтверждающие эту гипотезу. Исключив женщин с аберрациями Хq, мы определили Х-инактивационный статус. Для оценки неслучайной ИХХ мы использовали пороговый уровень і 70%, і 80%, і 90%. Частота случаев инактивации Хq у обследованных нами женщин с ПНЯ составил і 70-25%, і 80 — 11,7%, і 90 — 3,3%, в то время как в популяции, по данным Gale, Plenge, Lanasa, показатель ИХХ в пороговом уровне 70 и более составляет от 1,5-3,5%, что в 7,5 раз ниже полученных нами данных. При анализе результатов целесообразно отметить, что различные авторы предлагают отличающиеся друг от друга методы определения неслучайной инактивации Xq-хромосомы по CAG-повтору гена AR с детекцией меченых ПЦР-продуктов на генетических анализаторах. Например, в работе Sato и соавт. использовалась метилспецифическая ПЦР, а расчеты произведены для трех пороговых уровней: 70, 80 и 90% [9]; в работе Dijk и соавт. использовалась метилчувствительная ПЦР, рестриктаза Hpall, а пороговый уровень рассчитывался как изменение показателя ИХХ более чем на 30% при амплификации ДНК, обработанной Hpall, относительно нативной геномной ДНК [34]. В настоящей работе условия определения неслучайной инактивации по CAG-повтору AR также имели оригинальные модификации. Указанные различия в методах могут существенно влиять на частоту выявления неслучайной инактивации Хq. Это указывает на необходимость создания общепринятого протокола определения дифференциального метилирования Xq. Основываясь на данных об увеличении частоты неслучайной ИХХ с возрастом, мы проанализировали возраст 15 пациенток с ИХХ, который варьировал от 21 года до 43 лет. Таким образом, средний возраст пациенток составил 35,1±1,9 года, в связи с чем мы предположили, что как минимум один компонент неслучайной ИХХ не ассоциирован с возрастом, а связан с формированием ПНЯ. Как уже было сказано по поводу синдрома Тернера, некоторые гены, необходимые для функционирования яичников, могут быть необходимыми в 2 активных копиях и поэтому избегают ИХХ [35]. Предполагается, что незначительные структурные аберрации Хq могут приводить к ее неравновесной инактивации и далее к ПНЯ вследствие недостаточного функционирования генов, необходимые для развития яичников. Таким образом, одно из возможных объяснений состоит в том, что неслучайная ИХХ и связанные с ней ПНЯ являются результатом генетических нарушений, которые избирательно инактивируют и приводят к недостаточному функционированию генов, задействованных в формировании и развитии достаточного фолликулярного пула яичников. Поскольку случаи ярко выраженной неслучайной ИХХ были отмечены у женщин с ПНЯ, то мы предположили скрытые аномалии или мутации, которые не были идентифицированы при стандартном применении G-окраски, но эти нарушения могли привести к неслучайной ИХХ, клеточной селекции и затем к ПНЯ. Гены, вовлеченные в поддержание функционирования яичников, могут быть непосредственно повреждены при структурных аномалиях Хq и вызвать дисфункцию яичников. Генетические нарушения могут приводить к потере герменогенных клеток или снижению их количества относительно других клеточных субпопуляций, сопровождающихся неравновесной ИХХ и ПНЯ.

Таким образом, генетические факторы могут играть важную роль в развитии ПНЯ. Для установления природы этих факторов необходимы дальнейшие исследования групп сцепления в семьях, что подтверждается особенностями семейного анамнеза у наших пациенток.

источник

Воинова В. Ю., Юров И. Ю., Ворсанова С. Г., Юров Ю. Б.,

Исследование особенностей инактивации хромосомы Х в семьях с Х-сцепленной умственной отсталостью у детей

Нами был проведен анализ особенностей инактивации хромосомы Х у 247 индивидуумов женского пола из 150 семей с Х-сцепленными формами умственной отсталости, небольшой группы женщин (6 индивидуумов) из семей со структурными аномалиями хромосомы Х и 25 женщин из 22 семей с недифференцированными формами нарушений интеллекта. В контрольной группе исследовали 80 женщин без фенотипических проявлений врожденных и наследственных нарушений, а также не имеющих близких родственников с болезнями, связанными с аномалиями хромосомы Х. Применялся молекулярно-генетический метод, основанный на метил-чувствительной рестрикции участка Х-сцепленного гена андрогенового рецептора, включающего полиморфную последовательность тринуклеотидных повторов (ЦАГ)n, число которых в норме широко варьирует, что позволяет различить два аллеля гена андрогенового рецептора у лиц женского пола. Инактивация хромосомы Х определялась как соотношение инактивированных аллелей гена андрогенового рецептора разного родительского происхождения и оценивалась как неравная, если это соотношение превышало 20:80 (рис. 29, вверху). Чтобы избежать ошибок, связанных с неполной амплификацией и рестрикцией, учитывалась интенсивность аллелей в образцах ДНК, необработанных ферментом (HpaII-) (рис. 29, внизу). На рис. 30 представлены результаты количественного ПЦР-анализа инактивации хромосомы Х при случайной (равной, рис. 30, А) и неслучайной (неравной, рис. 30, Б) Х-инактивации.

Проводилось также исследование в парах «мать-пробанд», которое позволило установить направление сдвига инактивации хромосомы Х у женщин. На рис. 31 приведен пример анализа направления сдвига инактивации хромосомы Х: у женщины было определено два фрагмента ДНК разной длины, которые соответствуют двум аллелям гена AR, а у пробанда определен один фрагмент, который соответствует унаследованному от матери аллелю данного гена. Сопоставив их длины, можно установить, что в клетках женщины преимущественно инактивирована хромосома Х, унаследованная пробандом (т.е. несущая мутацию). У части женщин (N = 37) число CAG-повторов в обоих аллелях гена андрогенного рецептора было одинаково, как и в ранее проведенных исследованиях [Юров и др., 2005 б; Plenge et al., 2002]. В случаях, когда оба аллеля гена AR имели одинаковую длину, анализ Х-инактивации невозможно было провести. С учетом этих 37 случаев общая эффективность данного метода для всех образцов ДНК в настоящем исследовании составила 89,4 %, что соответствует данным литературы [Sharp et al., 2000].

Рис. 29. Результаты анализа инактивации хромосомы Х методом определения статуса метилирования экспансии (CAG)n повторов гена AR у женщины из семьи с Х-сцепленной умственной отсталостью. По оси абсцисс на электрофореграммах указана длина фрагментов ДНК (пн), по оси ординат – интенсивность флюоресцентного сигнала в относительных единицах флюоресценции – relevant fluorescent units (RFU). Электрофореграмма HpaII+ (вверху) соответствует амплифицированным участкам ДНК, обработанной метилчувствительной рестриктазой, а HpaII– (внизу) соответствует амплифицированным участкам необработанной ДНК. Стрелками выделены амплифицированные фрагменты гена AR. Пики одного и того же уровня показывают стандарт длины последовательностей ДНК

Рис. 30. Результаты анализа инактивации хромосомы Х: А – пример случайной (60:40), Б – неслучайной (91:9) Х-инактивации. HpaII+ соответствует ДНК, обработанной метилчувствительной рестриктазой, HpaII– соответствует необработанной ДНК. Стрелками выделены амплифицированные фрагменты гена AR

Рис. 31. Анализ направления сдвига инактивации хромосомы Х у матери пробанда с XLMR. У матери преимущественно инактивирована хромосома Х, которую унаследовал больной сын, т.е. хромосома Х с мутацией Х-сцепленного гена. Стрелками выделены амплифицированные фрагменты гена AR

Обследованные семьи с Х-сцепленными моногенными заболеваниями были разделены на 2 подгруппы. В первую входили Х-сцепленные формы умственной отсталости, проявляющиеся у мальчиков-гемизигот, при которых женщины-гетерозиготы имеют либо стертые признаки болезни, либо являются асимптоматическими носительницами (синдром умственной отсталости, сцепленной с ломкой хромосомой Х, синдромы Коффина-Лоури, Симпсона-Голаби-Бемеля, Барта, Лоу, гипогидротическая эктодермальная дисплазия и др.) В данной подгруппе Х-инактивация исследовалась у матерей, сестер и некоторых других родственниц. Во вторую подгруппу вошли семьи больных с Х-сцепленными синдромами, проявляющимися преимущественно у гетерозигот с внутриутробной летальностью для мальчиков-гемизигот. В данной подгруппе Х-инактивация исследовалась у пробандов женского пола и их матерей.

Результаты анализа инактивации хромосомы Х в исследованных группах семей показаны в табл. 19. В целом при Х-сцепленных синдромах, проявляющихся у девочек-гетерозигот, сдвиг Х-инактивации наблюдался у 45 % больных, а при Х-сцепленных заболеваниях, проявляющихся у гемизигот, сдвиг Х-инактивации определён у 46 % женщин из семей больных мальчиков (в 7 раз чаще, чем в контроле – 6,5 %).

Удельный вес сдвига инактивации хромосомы Х у женщин из семей с Х-сцепленными формами умственной отсталости

Удельный вес сдвига инактивации хромосомы Х среди индивидуумов женского пола

Достоверность различий с контролем

Абсолютное количество индивидуумов женского пола

Женщины (матери и другие родственницы) из семей с Х-сцепленными формами умственной отсталости, проявляющимися преимущественно у гемизигот, в том числе:

источник

Анализ на неравновесную инактивацию Х-хромосомы

Все клетки женщины имеют в своем хромосомном составе две Х-хромосомы. Одна из хромосом инактивируется еще внутриутробно. За счет этого организм покидает генетический материал, провоцирующий возникновение различных мутаций, в том числе которые могут привести к летальному исходу. После того, как становится известен хромосомный набор у эмбриона, и что там будут две Х-хромосомы, одна из них сразу же теряет все свои функции и свойства. Это является случайной инaктивaцией Х-хромосомы.

Нормальное функционирование женского организма происходит в том случае, когда действующая хромосома не претерпевает никаких изменений. В связи с тем, что в течение всей жизни клетки делятся, действующая и неактивная хромосома передаются дoчeрним клеткам. Когда Х-хромосома претерпевает определенные мутации, активируется ген XIST.

В этом случае, хромосома теряет часть своих способностей. Особенно негативным образом данная мутация влияет на возможность женщины забеременеть.

Для того, чтобы узнать, как функционирует Х-хромосома необходимо пройти анализ на неравновесную инактивацию Х-хромосомы. В Нижнем Новгороде это исследование проводится в клинике «Папа, мама и малыш». В результате данного анализа можно будет понять состояние женской хромосомы, а также сделать вывод о ее влиянии на весь организм.

Очень важно понимать, что исследование на неравновесную инактивацию Х-хромосомы позволяет выяснить состояние половой хромосомы женщины. Наличие каких-либо изменений говорит о том, что функционирование женского организма может быть нарушено.

В каком случае рекомендуется пройти данное исследование?

Анализ на неравновесную инактивацию Х-хромосомы в Нижнем Новгороде дает возможность понять причину отсутствия беременности, а также найти причину нерегулярных месячных или отсутствии овуляции. Поэтому, врачи назначают его в следующих случаях:

  • При постановке диагноза бесплодие;
  • В случае выявления поликистозных яичников;
  • При раннем и преждевременном прекращении функционирования яичников;
  • При нарушениях гормонального профиля, отвечающего за нормальное функционирование яичников.

Анализ на неравновесную инактивацию Х-хромосомы в Нижнем Новгороде в клинике «Папа, мама и малыш» проводят высококвалифицированные специалисты на высокоточном оборудовании. После получения результата можно точно сделать вывод о том, связан ли факт отсутствии беременности с нарушениями на генном уровне или нет.

Для получения более подробной информации и записи на анализ на неравновесную инактивацию Х-хромосомы в Нижнем Новгороде звоните по телефонам клиники: 8 (831) 412-90-29, 8 (831) 416-16-61.

Окончательно доказанные свежие данные: новые генетические анализы при бесплодии теперь и в России (и в Н.Н.)

Информируем Вас о последних исследованиях в области генетики: 1. Теперь доказана прямая связь (достоверно) между качеством эмбрионов и неравновесной инактивацией Х-хромосомы у женщины. При поликистозе яичников или наоборот, при преждевременном истощении фолликулярного запаса, а также при абсолютно нормальном АМГ, но при плохом качестве эмбрионов (причем не доживающих даже до 3го дня или стойком плохом их качестве) женщине показан анализ на неравновесную инактивацию Х-хромосомы. Инактивированная х-хромосома останавливает развитие эмбриона. При положительном анализе показана донорская яйцеклетка. 2. Разработана новая мужская панель мужского бесплодия ( всем известны классические анализы на 30 мутаций муковисцидоза и azf- мутацию), но сейчас доказана связь и с другими генами. Даже при нормальном кариотипе у мужчины могут быть нарушены гены половой дифференцировки и чувствительность к андрогенам. В мужской генетической панели более 30 генов. Исследования прошли все этапы клинических исследований в Европе и сейчас внедрены в практику (относятся к доказательной медицине), все эти исследования можно сдать уже у нас в клинике.

См. в разделе о генетике на нашем сайте (нижние иконки): hotim-rebenka.ru/genetika.html

Неслучайная инактивация Х-хромосомы

В группе СПКЯ неслучайная инактивация Х-хромосомы выявлена в 54% (27/50) случаев, что в 3,4 раза чаще, чем в группе контроля – 16,1% (9/56, p0,05). Изучение представленности неслучайной инактивации Х-хромосомы и полиморфизма гена андрогенового рецептора (АР) по CАG-повторам у пациенток с синдромом поликистозных яичников (СПКЯ). Здесь мы обсудим хромосомный и молекулярный механизмы инактивации Х-хромосомы. При СПКЯ у каждой второй пациентки выявлена неслучайная инактивация Х-хромосомы, ассоциированная с более выраженными нарушениями функции яичников.

В исследование вошли 53 пациентки с СПКЯ и 64 здоровые женщины с регулярным менструальным циклом. Выявлена зависимость клинических проявлений СПКЯ от генотипа больных: более тяжелые формы нарушений менструального цикла наблюдались у пациенток с неслучайной инактивацией Х-хромосомы. В группе пациенток с неслучайной инактивацией обнаружена взаимосвязь длин САG-повторов в гене АР с уровнем андрогенов.

СПКЯ диагностировали в соответствии с Роттердамскими критериями . Нарушения менструального цикла по типу олигоменореи выявлены у 45 (84,9%) пациенток, по типу аменореи – у 3 (5,7%). Выявление неслучайной инактивации Х-хромосомы осуществляли с помощью методов, основанных на определении дифференциального метилирования активной и неактивной Х-хромосомы. Средние значения SBM в основной и контрольной группах не различались: 22,02±2,77 и 21,42±2,26 соответственно.

Сравнительный анализ выявил статистически значимые различия представленности неслучайной инактивации Х-хромосомы между основной и контрольной группами (pНаличие неслучайной инактивации Х-хромосомы ассоциируется с более ранними и более тяжелыми нарушениями функции яичников в виде аменореи и олигоменореи с менархе. Неслучайная инактивация Х-хромосомы ассоциируется с более высокой частотой коротких аллелей гена АР и его трансактивационной активностью.3. Большинство мужчин с синдромом ломкой X хромосомы имеют сушественную задержку психомоторного развития переходящую в умственную отсталость.

Большинство случаев ПНЯ спорадические, частота проявления у женщин с хромосомным набором 46 ХХ составляет в среднем около 1%, при этом доказана тесная связь данного нарушения c возрастом. Увеличение количества повто-ров CGG непосредственно свя¬зано с возникновением синдрома ломкой Х хромосомы и связанных с ней расстройств, которые проявляются как у молодых, так и у пожилых пациентов.

Материнская премутация гена FMR1 у потомков может переходить в полную мутацию, приводя к возникновению синдрома ломкой Х-хромосомы, тогда как отцовская премутация, как правило, стабильна. Неравновесная инактивация Х-хромосомы может свидетельствовать о наличии минимальных генетических перестроек, что оказывает негативное влияние на функцию яичников.

Материал и методы исследования

Одна из половых хромосом спонтанно утрачивает свою функцию и структуру, что называется процессом случайной инактивации. При небольших мутациях – делеции, происходит запуск механизма, который приводит к утрате функций половой Х-хромосомы и сбою детородной программы женского организма.

При ее обнаружении возможны генетические проблемы в диагностировании женского бесплодия. Женщины должны знать, что исследование неравновесной инактивации Х-хромосомы позволяет выявить состояние половой хромосомы.

Проведение анализа позволит более точно диагностировать истинную причину бесплодия и скорректировать схему лечения. Анеуплоидия по Х-хромосоме — одна из наиболее частых онтогенетических аномалий. Проливая свет на механизмы Х-инактивации, эти особенности могут быть диагностически значимыми для установления неактивной Х-хромосомы в клиническом материале. Область промотора многих генов в неактивной Х-хромосоме существенно модифицируется присоединением метильной группы к цитозину при действии фермента ДНК-метилтрансферазы.

Дополнительные различия между активными и неактивными Х-хромосомами связаны с гистоновым кодом и оказались существенной частью механизма Х-инактивации. У пациентов с дополнительными Х-хромосомами все Х-хромосомы, кроме одной, инактивируются. Таким образом, все диплоидные соматические клетки как у мужчин, так и у женщин, имеют единственную активную Х-хромосому, независимо от общего числа Х- или Y-хромосом.

Примечательно, что эти гены не распределены произвольно по Х-хромосоме: большинство генов, избегающих инактивации, расположены на плече Хр (до 50%), по сравнению с Xq (несколько процентов). Хотя точный способ действия гена XIST неизвестен, Х-инактивация не может происходить в его отсутствие.

Средний возраст по группам: 27,3±5,74 и 25,6±4,28 года, индекс массы тела: 24,2±5,47 и 22,4±0,11 кг/м² соответственно. Гиперинсулинемию и нарушения углеводного обмена диагностировали на основе результатов перорального 2-часового глюкозотолерантного теста с 75 г глюкозной нагрузки. При сравнении частотных показателей для оценки достоверности использовали χ2 (с поправкой Йейтса для таблиц 2×2)или точный критерий Фишера.

Читайте также:

Поэтому женщины с неслучайной инактивацией Х-хромосомы, вероятно, должны входить в группу риска по овуляторной дисфункции, нарушению ритма менструаций и бесплодию. Предположительно это связано с тем, что неслучайная инактивация хромосомы Х приводит к недостаточному функционированию генов, задействованных в формировании и развитии фолликулярного пула яичников.

Инактивация х-хромосомы и бесплодие - Бесплодие

Barr и соавторы (1950), Klinger (1957) и др. предполагали, что половой хроматин образуется гетерохроматическими районами двух половых хромосом (XX). Доказательством этого они считали тот факт, что половой хроматин встречается в клетках самок млекопитающих, имеющих две Х-хромосомы, чего не наблюдается в клетках самцов, где присутствует только одна Х-хромосома. Незначительный процент клеток, содержащих половой хроматин, и его малая величина у самцов ставились в связь с тем, что из-за малых размеров Х-хромосомы в клетках мужских организмов не хватает материала для формирования телец Барра. Однако эта гипотеза в дальнейшем не подтвердилась. Против нее свидетельствовал, в частности, тот факт, что половой хроматин не обнаруживался в полиплоидных клетках самцов, где число Х-хромосом было достаточно для его формирования (Klinger, Schwarzacher, 1960)*.

Позднее было доказано, что половой хроматин образуется за счет одной Х-хромосомы. Ohno и соавторы (1959) исследовали цикл клеток крысы, установив, что только одна Х-хромосома клеток самки находится в гетеропикнотическом состоянии и в интерфазном ядре образует основную массу полового хроматина. То же самое было обнаружено и в клетках рака молочной железы мышей разных линий (Ohno, Hauschka, 1960) (рис. 2).

Рис. 2. Метафазные пластинки нормальной женской клетки до и после ауторадиографии. Стрелка указывает на поздноредуплицирующуюся Х-хромосому (по Kikuchi, Sandberg, 1965).

В дальнейшем Ohno и Makino (1961), используя радиоактивную метку (Н3-тимидин) и авторадиографию в культуре ткани костного мозга индивидов с различным числом Х-хромосом в соматических клетках, обнаружили, что только одна Х-хромосома редуплицируется одновременно с аутосомами, подвергаясь спирализации и инактивации, а вторая Х-хромосома отстает в своем цикле. Исследования Taylor (1960), Morishima и соавторов (1962), German (1964) и др. подтвердили существование поздно редуплицирующейся Х-хромосомы, находящейся в гетеропикнотическом состоянии, обычно располагающейся по периферии интерфазного ядра и цитологически обнаруживающейся в виде телец Барра.

Было установлено, что по количеству глыбок полового хроматина можно судить о числе Х-хромосом. Согласно правилу Stewart (1960), количество глыбок полового хроматина в каждом диплоидном наборе равно n—1 (n — число Х-хромосом). Так, например, в тетра-плоидных клетках и интерфазных ядрах содержатся два тельца полового хроматина. Женщины Х0-негативны по половому хроматину, а клетки женщин — XX и мужчин — XXY несут лишь по одному тельцу полового хроматина (А. А. Прокофьева-Бельговская, 1963; Barr, 1959).

Учение об инактивации одной из Х-хромосом в соматических клетках женского организма было сформулировано почти одновременно несколькими исследователями, работавшими независимо друг от друга. Например, Beutler и соавторы (1962) показали, что ферменты, контролируемые генами, локализованными в Х-хромосоме, обнаруживаются примерно в одинаковом количестве как у женщин, так и у мужчин, хотя, казалось бы, у женщин таких ферментов при наличии двух Х-хромосом должно быть в 2 раза больше. Отсюда следовало, что из двух Х-хромосом клеток женского организма функционирует только одна, а вторая — инактивирована и образует глыбку полового хроматина. Было также доказано, что у женщин-гетерозигот по дефициту энзима Г6ФД имеются две популяции эритроцитов: одна — с нормальным и вторая с мутантным геном (Beutler et al., 1962; Gartler et al„ 1962a, b).

Примерно в то же время были опубликованы еще две сходные гипотезы —«инактивированной Х-хромосомы» (Lyon, 1961, 1962) и «фиксированной дифференциации Х-хромосомы» (Grumbach et al., 1960, 1962). Однако Lyon первой более четко сформулировала основные закономерности поведения Х-хромосом в клетках млекопитающих.

Переход одной из Х-хромосом в гетеропикнотическое состояние означает ее инактивацию, преследующую цель «компенсации дозы»: в клетках женского и мужского организма остается по одной активно функционирующей Х-хромосоме. Считается, что Y-хромосома содержит в основном локусы, определяющие развитие организма в сторону мужского пола (Galton, 1966).

Основные положения гипотезы Lyon сводятся к тому, что у млекопитающих в клетках развивающегося эмбриона женского пола, находящегося на ранних стадиях формирования, происходит переход в гетеропикнотическое состояние (инактивация) одной из Х-хромосом. В одних клетках инактивации подвергается отцовская, в других — материнская (по происхождению) Х-хромосома.

A. A. Prokofjeva-Belgovskaya (1966), а также Grumbach и соавторы (1962) указывают, что у насекомых (дрозофила) в противоположность тому, что наблюдается у млекопитающих, инактивации подвергается только отцовская Х-хромосома, сохраняющая в клетках взрослых особей свое гетеропикнотическое состояние. Последнее характерно для хромосомы на всех стадиях сперматогенеза.

В каждой клетке эмбриона женского пола у млекопитающих выбор того, какая Х-хромосома будет инактивирована— отцовская или материнская,— происходит случайно **. Поэтому представляется справедливым замечание, которое сделал Griineberg (1967): так как предполагается, что инактивация происходит па ранних стадиях развития, когда клетки данной структуры весьма немногочисленны, то случайный подбор «образцов инактивации» может вести к неравномерному распределению клеток с нормальным и мутантным фенотипом (у взрослых особей); допустимо даже, что все клетки могут быть одного «сорта».

Таким образом, возникает мозаичность соматических клеток женского организма: в одних клетках половой хроматин образован гетеропикнотической Х-хромосомой отцовского, в других — материнского происхождения. При наличии гетерозиготности эта мозаичность может служить объектом генетического анализа.

Lyon приводит некоторые доказательства справедливости своей гипотезы. Например, мыши с генотипом Х0 имеют нормальный фенотип; это указывает на то, что одна Х-хромосома оказывается достаточной для нормального развития организма. Мыши, гетерозиготные по локусу, сцепленному с полом, имеют мозаичный фенотип; все сцепленные с полом мутанты по окраске шерсти отличаются этой особенностью. Такая же мозаичность развивается и в случае транслокации аутосомного сегмента на гетеропикнотическую Х-хромосому (см. главу VI).

В опытах на самках мышей, гетерозиготных по двум неаллельным генам, Lyon (1963) показала, что в том случае, когда гены-мутанты расположены на разных Х-хромосомах, одновременной фенотипической экспрессии обоих мутантов в одних и тех же участках тела (например, при изучении окраски шерсти) не наблюдалось. Эти опыты подтверждали справедливость учения о неактивной Х-хромосоме.

De Mars (1967) предполагает, что в Х-хромосоме имеются специальные гены, выделяющие вещества, индуцирующие спирализацию Х-хромосомы. Этот эффект De Mars считает элементарным процессом репрессии, охватывающим целиком всю гетеропикнотическую Х-хромосому и препятствующим ее репликации и считыванию генетической информации. При этом видимая в световом микроскопе конденсация хроматина является частым, но не обязательным условием репрессии неактивной Х-хромосомы.

В соответствии с гипотезой Лайон способность Х-хромосомы к переходу в гетеропикнотическое состояние наследуется в клеточных поколениях. Comings (1966) приводит литературные данные, подтверждающие это положение: клоны фибробластов, взятых у одной негритянки, гетерозиготной по электрофоретическим А- и В-вариантам сцепленного с Х-хромосомой энзима Г6ФД, синтезировали только А- или только В-линию, но не обе вместе. Comings, используя депрессоры Х-хромосомы (полиэтиленсульфонат и другие полианионы), на культуре фибробластов показал, что эти агенты не дают эффекта де-репрессии, из чего следовало, что инактивация обусловлена не спирализацией хромосомы, а ядерными протеинами.

Такой вывод покоится на том основании, что в опытах автора, несмотря на уменьшение в культуре числа фибробластов, имеющих половой хроматин, каждый клон гетерозиготных клеток обнаруживал присутствие только одного из вариантов энзима Г6ФД (А или В).

Гипотезу Лайон подвергает критическому анализу Griineberg (1966, 1967). Изучив эффект сцепленных с полом генов, он делает вывод, что гипотеза Лайон отвергается на многоклеточном и частично подтверждается на клеточном уровне. Выделив из известных 60 генов человека, сцепленных с полом, 26 генов с доказанной гетерозиготностью, он подразделил их на три группы. В первую группу (17 генов, например, дальтонизма) вошли гены, для которых известен лишь большой (многоклеточный) эффект; во вторую — 4 гена с гуморальной проявляемостью (гемофилия и др.); в третью — 5 генов, действие которых прослеживается на клеточном уровне (например, дефицит энзима Г6ФД и др.).

Мы не имеем возможности подробно остановиться на этой работе, однако отметим, что не всегда позиция автора представляется достаточно обоснованной. Отклонения фенотипа (на многоклеточном уровне) от того, который можно было бы предсказать на основании гипотезы Лайон, могут развиваться в силу многих, еще неясных причин. Lion (1961) отмечает, например, что наличие определенного числа нормальных клеток, присутствующих в мозаике с мутантными, может обеспечивать нормальный фенотип; в других случаях в аналогичной ситуации возможна неполная пенетрантность признака у гетерозигот. Такую трактовку можно признать вполне приемлемой. А. А. Нейфах (1965) указывает, что клетки различного генотипа могут обмениваться продуктами своей жизнедеятельности, при этом мутантные клетки приобретают нормальный фенотип. Эти, в частности, соображения необходимо учитывать при оценке эффекта генов на многоклеточном уровне.

Отклонения со стороны фенотипа, противоречащие на первый взгляд гипотезе Лайон, могут стоять в связи с существованием в неактивной Х-хромосоме активно функционирующих локусов (см. главу VI).

Учение о генетической инактивации Х-хромосомы подробно излагается в работах А. Ф. Захарова (1968), Lyon (1966), Ohno (1967) и др.

Кроме гипотезы Лайон, имеется, как уже отмечалось, еще одна, родственная ей гипотеза «фиксированной дифференциации Х-хромосомы», выдвинутая примерно в то же время Grumbach и соавторами (1960, 1962, 1963). Эти авторы защищают те же представления, что и Lyon. Они показали, что содержание энзима Г6ФД в эритроцитах мужчин и женщин лежит в пределах нормы. Это обстоятельство Grumbach и сотрудники рассматривают как веское доказательство учения о «единственной активной Х-хромосоме». Рассматривая инактивацию гетеропикнотических Х-хромосом как механизм «компенсации дозы», они отмечают, что экстрааутосомы в противоположность сверхчисленным половым хромосомам обычно служат причиной сильных фенотипических сдвигов, поскольку они остаются в активном состоянии.

Существенным моментом исследований на мышах, предпринятых Grumbach с соавторами, являются данные о том, что в соматических клетках женского организма гетерохроматинизации, т. е. инактивации, как правило, подвергается структурно измененная Х-хромосома (деления, транслокация аутосомных сегментов)***. Характерно, что в этих случаях величина телец Барра отражает характер структурного нарушения формирующей их Х-хромосомы (уменьшение в случае делеции, увеличение при транслокации)****. Эту закономерность подтвердили Klinger и соавторы (1965), а также Ockey и соавторы (1966).

Очевидная предпочтительная гетерохроматинизация измененной Х-хромосомы, по Grumbach и соавторам (1963), Gartler и Sparkes (1963), может объясняться селекцией клеток, происходящей после того, как во всех эмбриональных клетках произошла гетерохроматинизация одной из Х-хромосом (наугад: в одних клетках отцовской, в других — материнской). В случае транслокации аутосомного элемента на Х-хромосому инактивация последней влечет за собой, как показали некоторые авторы, инактивацию и прикрепившихся аутосомных локусов, В результате возникает несбалансированность генотипа и из-за понижения жизнеспособности клетки с измененной Х-хромосой постепенно элиминируются.

Однако при возникновении трисомии по транслоцированному аутосомному сегменту, наоборот, вполне жизнеспособными могут оказаться как клеточные варианты с инактивированной Х-хромосомой, несущей аутосомный элемент, так и клетки с нормальным набором XX.

Инактивация аберрантной Х-хромосомы, таким образом, может обеспечивать генетическую сбалансированность, при этом состояние анеуплоидности носит лишь кажущийся характер.

Представляет интерес и другое объяснение, которое предлагают Grumbach и соавторы для анализа факта предпочтительной инактивации структурно измененных Х-хромосом. Авторы говорят о так называемой селективной индукции, развивая «модель эписомального фактора».

Некоторый эписомальный фактор в период раннего эмбриогенеза инкорпорируется в Х-хромосому, в ее специальный рецептивный локус (в каждой клетке). Сразу после этого происходит выработка вещества, которое комбинируется с другим неинкорпорированным фактором клетки и инактивируется им. Поэтому другая Х-хромосо-ма теряет возможность перехода в изопикнотическое состояние. На базе этих представлений можно легко понять хорошо известный фактор, заключающийся в том, что в клетках, независимо от общего числа Х-хромосом, всегда присутствует только одна изопикнотическая хромосома, успевающая (в ранних эмбриональных клетках) первой захватить гипотетический эписомальный фактор.

Grumbach и соавторы допускают еще, что Х-хромосома, лишившаяся эписомального фактора, начинает продуцировать вещество, репрессирующее синтез молекул РНК на ДНК (типа актиномицина D) и способное как-то тормозить способность ДНК к репликации (что соответствует явлению запаздывания гетероциклической Х-хромосомы в митотическом цикле).

Роль эписомального фактора, таким образом, сводится к предупреждению образования вещества репрессора в Х-хромосоме, которая должна остаться в активном состоянии. Эта схема хорошо объясняет факт предпочтительной гетерохроматинизации Х-хромосомы, имеющей делецию (утрата рецептивного локуса, захватывающего эписомальный фактор), но не может удовлетворительно трактовать это явление, если имеется Х-хромосома с транслоцированным аутосомным участком. Evans и соавторы (1965) не подтвердили факта предпочтительной гетерохроматинизации структурно измененной Х-хромосомы (Х-аутосомная транслокация) в клетках у мышей.

Использованные источники: www.medical-enc.ru

инактивация Х-хромосомы и FMR1 в ЭКО

Добрый день! Готовлюсь к длинному протоколу ЭКО (первый в моей жизни). В числе прочего, сдавала анализы на инактивацию Х-хромосомы и FMR1. Обнаружено: 1. Выявлена неслучайная активация Х-хромосомы. Генотип 20/22 (CAG)

2. Полиморфизмы CGG в гене FMR1: Определен генотип CGG-повтора 33/35 (в пределах нормы)

Мне 32 года, кариотип 46ХХ, еще сдавали полиморфизмы гемостаза. все в норме, кроме MTHFR = T/T, гомоцистеин в норме, показатели свертываемости чуть выше нормы. Сейчас отправили на пиявок по этому поводу.

ФСГ крутится около 10-11, ЛГ всегда в норме (около 5), антимюллеров гормон — 8,5. По УЗИ фоликулярный резерв «хороший». До этого было 4 стимулированных ИИ с донорской спермой (у мужа азооспермия), все провалились. Количество фоликулов в стимулированных циклах: 3,1,1,1. 1я и 2я стимуляция — клостилбегит. 3я — Пурегон по 50ед. 4я — Пурегон 75ед + Менопур 75ед.

Без стимуляций тоже стабильно вырастает 1 фоликул, овуляция происходит сама, цикл 29-31 день.

Скажите, пожалуйста, что обозначают данные результаты анализов по х-хромосоме? Являются ли эти гены причиной низкого ответа на стимуляцию? Есть ли смысл идти в протокол ЭКО, если яичники могут опять вырастить только 1 фоликул? Правильно ли я понимаю, что это является причиной малого количества фоликулов в стимуляции и их плохую способность к оплодотворению и последующему дроблению клеток? Или может быть это значит опасность для здоровья ребенка? Информации очень мало.

Была бы очень вам признательна за информацию по результатом пациенткок с неслучайной инактивацией в программах ЭКО, не официальную и подтвержденную, хотя бы из личного опыта.

Использованные источники: forums.rusmedserv.com

Исследование неравновесной (неслучайной) инактивации Х-хромосомы

Неравновесная инактивация Х-хромосомы может свидетельствовать о наличии минимальных генетических перестроек, что оказывает негативное влияние на функцию яичников. Исследование неравновесной инактивации Х-хромосомы является эффективным методом генетического диагностирования, который позволяет провести анализ состояния активных хромосом в женском организме.

Аномалии в ДНК матери – прямая угроза рождению здорового ребёнка, способного в течение жизни развиваться умственно и физически. Пройдите обследование в МЖЦ, чтобы получить семейный анамнез, выяснить причины бесплодия, правильно подготовиться к ЭКО. У нас вы можете проконсультироваться по вопросам возможностей лечения генетических отклонений.

Стоимость анализа на онтогенетическую аномалию*

  • 4 800 Р Исследование неравновесной (неслучайной) инактивации Х-хромосомы

Расчет стоимости лечения Все цены

* Принимаются пациенты старше 18 лет.

Особенности проведения исследования

Каждая клетка организма женщины содержит набор из двух Х-хромосом, одна из которых активна, вторая – нет. Подобное клеточное состояние позволяет минимизировать риск развития генных мутаций, которые в тяжелой форму могут привести к гибели. Подобный феномен, наблюдающийся в половых хромосомах, происходит в процессе внутриутробного развития плода.

Одна из половых хромосом спонтанно утрачивает свою функцию и структуру, что называется процессом случайной инактивации. При небольших мутациях – делеции, происходит запуск механизма, который приводит к утрате функций половой Х-хромосомы и сбою детородной программы женского организма.

  • наличие стойкого женского бесплодия, независимо от возраста;
  • склерополикистоз яичников;
  • некоррегируемые перепады гормональной активности яичников;
  • преждевременное увядание и/или истощение яичников.

Интерпретация полученных результатов

Неслучайная инактивация Х-хромосомы может оцениваться исключительно опытным специалистом в данной сфере. В результатах анализа указывается наличие или отсутствие неравновесной инактивации Х-хромосомы. При ее обнаружении возможны генетические проблемы в диагностировании женского бесплодия.

Женщины должны знать, что исследование неравновесной инактивации Х-хромосомы позволяет выявить состояние половой хромосомы. При выявлении структурных изменений речь идет о частичной утрате их функции, что негативно сказывается на детородной функции женского организма. Проведение анализа позволит более точно диагностировать истинную причину бесплодия и скорректировать схему лечения.

Стоимость исследования неравновесной (неслучайной) инактивации Х-хромосомы – 4 800 рублей.

Использованные источники: www.medzhencentre.ru

Обнаружена неравновесная инактивация Х-хромосомы

Здравствуйте! У меня в июле 2018г. была неудачная попытка ЭКО ИКСИ (у мужа проблема с подвижностью сперм-ов), было только 2 эмбриона, которые с 3его дня стали отставать в развитии. После этого сдала анализ- обнаружена неравновесная инактивация Х-хромосомы (соотношение инактив. Х-хромосом от одного родителя к инактивированным Х-хромосомам от др. Родителя 80: 20). Соотношение инактивированных Х-хромосом81/19, генотип CAG-повторов в гене AR 20/25. Вопрос: 1. Неудачная попытка ЭКО была из-за этой хромосомной поломки? 2. Могу ли я забеременеть при помощи ЭКО со своими яйцеклетками и или только с донорскими, и смогу ли я вообще выносить ребенка?

2. И вообще что значит такой результат анализа- расшифруйте пожалуйста.

Заранее благодарю вас за ответ!

Похожие и рекомендуемые вопросы

3 ответа

Поиск по сайту

Что делать, если у меня похожий, но другой вопрос?

Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос , или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос , и через некоторое время наши врачи на него ответят. Это бесплатно. Также можете поискать нужную информацию в похожих вопросах на этой странице или через страницу поиска по сайту . Мы будем очень благодарны, если Вы порекомендуете нас своим друзьям в социальных сетях .

Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 45 направлениям: аллерголога , венеролога , гастроэнтеролога , гематолога , генетика , гинеколога , гомеопата , дерматолога , детского гинеколога , детского невролога , детского хирурга , детского эндокринолога , диетолога , иммунолога , инфекциониста , кардиолога , косметолога , логопеда , лора , маммолога , медицинского юриста , нарколога , невропатолога , нейрохирурга , нефролога , онколога , онкоуролога , ортопеда-травматолога , офтальмолога , педиатра , пластического хирурга , проктолога , психиатра , психолога , пульмонолога , ревматолога , сексолога-андролога , стоматолога , уролога , фармацевта , фитотерапевта , флеболога , хирурга , эндокринолога .

Мы отвечаем на 94.72% вопросов.

Использованные источники: 03online.com

Генетические особенности синдрома ломкой Х-хромосомы

16′17Мар

Среди группы наследственных болезней есть два заболевания, относящихся к самым частым причинам интеллектуальной недостаточности. Самая известная и наиболее распространённая патология – синдром Дауна, связанный с наличием лишней 21-ой хромосомы в геноме человека. В этой статье мы расскажем о втором по распространенности наследственном заболевании, которое приводит к умственной отсталости, а также может сопровождаться другими клиническими проявлениями.

Синдром ломкой X-хромосомы или синдром Мартина-Белл является результатом нарушения в гене FMR1 (fragile X mental retardation-1), который расположен на Х-хромосоме и играет важную роль в появлении и развитии нервных связей, обучении и запоминании. Частота этого синдрома среди мальчиков составляет 1:4000.

Так называемая «ломкость» X-хромосомы проявляется в том, что хромосома выглядит нетипично при специальном окрашивании, как будто один кусок отделился, хотя физически она остается цельной. Генетическая основа этого явления заключается в увеличении числа тринуклеотидных повторов CGG в гене FMR1, расположенном на X-хромосоме.

У здоровых людей число повторов в этом гене колеблется от 5 до 54. Если повторов больше 200, то наработка белка с гена FMR1 нарушается, что приводит к развитию синдрома Мартина-Белл и клиническому проявлению заболевания. Премутационное состояние — это количество повторов CGG от 55 до 200. В таком состоянии заболевание у людей в типичной форме не проявляется, но чем больше повторов в этом гене у носителя, тем больше вероятность того, что у ее или его детей количество повторов будет больше 200 и заболевание разовьется. В случае носительства премутации при формировании половых клеток количество повторов может увеличиваться, поэтому если у родителя количество повторов от 55 до 200, то высока вероятность рождения ребенка с мутантным геном FMR1 и синдромом Мартина-Белл. При этом носительство премутационного состояния будущим папой и мамой неравнозначно по вероятности возникновения мутантного аллеля у их детей: если носитель – мама, то вероятность значительного увеличения числа повторов гораздо выше. Количество повторов от 45 до 54 является промежуточной формой, которая не имеет никакого влияния на здоровье человека, но может приводить к проблемам у будущих поколений, как и в случае премутационного состояния гена.

Важно учитывать, что наследование и развитие заболевания зависит от пола, так как ген FMR1 находится на Х-хромосоме. У мужчин только одна Х-хромосома, которую они получают от матери. Поэтому, в случае, если эта одна хромосома оказалась «ломкой», у них проявляется заболевание. У женщин две Х-хромосомы, однако активно работает только одна из них. Поэтому наличие одной Х-хромосомы с мутантным геном FMR1 может не проявляться клинически, в случае инактивации именно «ломкой» хромосомы, или приводить к развитию заболевания в 30-50% случаев. Мужчина с ломкой Х-хромосомой может передать её всем дочерям, но ни одному из сыновей. Женщина с мутантной хромосомой имеет шансы передать её как сыновьям, так и дочерям с равной вероятностью.

Премутационное состояние гена влияет как на судьбу потомков носителя такого гена, так и непосредственно на его здоровье:

  1. Развитие первичной недостаточности яичников (FXPOI) (снижение овариального резерва и наступление менопаузы до 40 лет). Мутация FMR1 является причиной преждевременного истощения яичников у 5% женщин с этим диагнозом. Среди носительниц премутации примерно у четверти развивается это состояние. Оно влияет не только на общие репродуктивные возможности, но и на подбор протокола стимуляции при ВРТ, так как часто оказывается причиной бедного ответа яичников на стимуляцию. Интересно, что по данным, полученным в центре Genetico, хотя бедный ответ яичников на стимуляцию влияет на число получаемых в цикле эмбрионов, он не приводит к увеличению доли анеуплоидных эмбрионов.

  2. Тремор/атаксия, ассоциированные с ломкой Х-хромосомой (FXTAS). Это состояние чаще развивается у мужчин: при носительстве премутации мужчиной проявляется в 33% случаев, а при носительстве премутации женщиной – лишь в 5-10%. Синдром FXTAS начинает проявляться в пожилом возрасте. Наблюдается тремор, шаткая походка, может страдать речь.

Метод диагностики, используемый в лаборатории Genetico, основан на использовании полимеразной цепной реакции с особым набором праймеров, позволяющих не только детектировать нормальное, премутационное и мутационное состояния, но и точно определить количество повторов в случаях, когда их меньше 200. Такая диагностика позволяет выявить синдром ломкой X-хромосомы на молекулярном уровне, а также оценить вероятность рождения ребенка с этим синдромом и возможность развития у пациента расстройств, связанных с увеличенным количеством повторов в гене FMR1. Такая диагностика также позволяет детектировать наличие AGG повторов среди повторов CGG. Полагают, что участки AGG, прерывающие длинную последовательность из CGG повторов, придают ДНК устойчивость и снижают риск увеличения количества повторов в следующем поколении.

Генетический тест, определяющий количество повторов в гене FMR1, рекомендуется пройти в первую очередь женщинам с синдромом преждевременного истощения яичников или с выявленной неслучайной инактивацией Х-хромосомы (косвенный признак), семьям, в которых есть сыновья с интеллектуальной недостаточностью. Также анализ состояния гена FMR1 необходим:

1) женщинам с репродуктивными проблемами или нарушениями фертильности, связанными с повышенным уровнем фолликулостимулирующего гормона (ФСГ)

2) пациентам с интеллектуальной недостаточностью и их родственникам

3) тем, у кого в семье были случаи синдрома ломкой Х-хромосомы или умственной отсталости без точного диагноза

4) женщинам, у родственников которых наблюдались нарушения, связанные с премутационным состоянием FMR1

5) пациентам с поздно проявившимся тремором и мозжечковой атаксией (нарушения согласованности работы мышц из-за поражения систем мозга, управляющих движением мышц).

В случае обнаружения бессимптомного носительства мутации в гене FMR1 у женщины может быть рекомендовано использование донорских ооцитов или проведение преимплантационной генетической диагностики (ПГД) с целью исключить возможность проявления синдрома у ребенка. Также важно правильно оценивать риск рождения больного ребенка в случае премутационного состояния гена FMR1 у будущих родителей. В таком случае по результатам теста рекомендуется консультация врача-генетика.

Автор: Очир Мигяев

Стажер лаборатории Genetico


Смотрите также